ELISA ar sliktu rezultātu?Sekojiet mums, lai izvēlētos pareizo Elisa šķīvi.
Piemērotas ELISA plāksnes izvēle ir pirmais solis uz veiksmīgu ELISA eksperimentu, taču daudzi cilvēki to ignorē. Veicot eksperimentus, cilvēki bieži vien apsver tikai pašu eksperimentu, bet nezina, ka produktam bieži ir liela ietekme uz eksperimentu. Pareiza produktu izvēle veicinās eksperimenta panākumus. Veicot ELISA eksperimentus, mēs parasti ņemam vērā šādus faktorus:
1. Apakšdaļas forma
Pašlaik ražotāji ar enzīmu iezīmētās iedobes projektē kā neatkarīgas kolonnas un attiecīgi palielina attālumu starp iedobēm, lai tās varētu atdalīt atsevišķi, tādējādi samazinot savstarpējo piesārņojumu. Dažādiem Elisa plākšņu veidiem ir dažādas akas dibena formas. Šeit ir dažas izplatītas caurumu dibena formas:
Plakans dibens: apakšdaļa ir horizontāla, saukta arī par F dibenu. Gaisma netiks novirzīta cauri apakšai, kas var vislielākajā mērā pārraidīt gaismu. Izmantojiet eksperimentiem, kuriem redzamības vai citu iemeslu dēļ nepieciešams apaļš dibens.
Apaļa apakša: pazīstama arī kā U veida apakšdaļa, nodrošina vislabākos tīrīšanas rezultātus un hibrīda veiktspēju, kas ir piemērota lietojumiem, kuriem nepieciešams pārbaudīt nogulsnes.
C-dibens: Tas var nodrošināt labu tīrīšanas efektu starp plakano dibenu un apaļo dibenu, vienlaikus apvienojot plakanā dibena priekšrocības.
Konusa apakšdaļa: pazīstama arī kā V veida apakšdaļa, tā ir piemērota precīzai paraugu ņemšanai un mikro paraugu uzglabāšanai, lai optimāli atgūtu mazus tilpumus.
2. Elisa šķīvja krāsa
Elisa plāksnei ir trīs krāsas: caurspīdīga, melna un balta.
Lielākā daļa ELISA kā eksperimentālos materiālus izvēlas caurspīdīgas plāksnes. Luminiscences noteikšanai parasti izmanto baltas un melnas Elisa plāksnes. Melnā ELISA plāksne pati absorbē gaismu, tāpēc tās signāls ir vājāks nekā baltās ELISA plāksnes signāls. Melnās Elisa plāksnes parasti izmanto spēcīgākas gaismas noteikšanai, piemēram, fluorescences noteikšanai; gluži pretēji, baltas Elisa plāksnes var izmantot vājākas gaismas noteikšanai, un tās bieži izmanto vispārējai hemiluminiscencei un substrāta krāsu attīstībai (piemēram, duālā luciferāze). reportiera gēnu analīze).
3. Elisa plāksnes materiāls
Parastie materiāli ir polietilēns (PE), polipropilēns (PP), polistirols (PS), polivinilhlorīds (PVC) un polikarbonāts (PC).
Visplašāk izmantotie materiāli ELSIA ir polistirols un polivinilhlorīds. Polivinilhlorīda mīkstā plāksne ir plāna, to var griezt, un cena ir zema. Trūkums ir tāds, ka apdare nav tik laba kā polistirola plāksne, un cauruma apakšdaļa nav tik plakana kā polistirola. Bet atbilstošā fona vērtība arī palielināsies. Parasti apstrāde ar jonu potēšanu tiek veikta uz ELISA plāksnes virsmas, un polimēra virsmā tiek ievadītas aktīvās funkcionālās grupas, piemēram, aldehīdu grupas, aminogrupas un epoksīda grupas, lai uzlabotu substrāta virsmas veiktspēju.
4. dažādi saistīšanas mehānismi
Pārklājuma materiāla efektīva saistīšana ar plāksnes apakšējo virsmu ir būtisks ELISA solis. Tāpēc pirms eksperimenta rūpīgi jāanalizē pārklājamās vielas strukturālās īpašības un ķīmiskās īpašības, lai izvēlētos piemērotu Elisa plāksni. Vispārīgi runājot, ir vairāki veidi, kā piesaistīt pārklājuma materiālu plāksnes apakšai: pasīvā adsorbcija, kovalentā saistīšana un afinitātes uztveršana.
Pasīvā adsorbcija: pasīvās adsorbcijas mehānisms ir sarežģīts, un saistīšanās starp pārklājuma materiālu un plāksnes dibenu galvenokārt ir atkarīga no starpmolekulāriem spēkiem (van der Waals spēks) un ūdeņraža saitēm. Vairumā ELISA testu pārklājuma vielas saistīšanās ar plāksnes dibenu tiek veikta ar pasīvo adsorbciju. Parasti saistīšanās starp vidējas un lielas molekulmasas antigēniem (vai antivielām) un plāksnes dibenu tiek veikta ar pasīvo adsorbciju. Izvēloties Elisa plāksni, bieži tiek ņemtas vērā plāksnes apakšējās virsmas hidrofobās/hidrofilās īpašības. Nākamajā tabulā ir norādīts dažādu hidrofilu substrātu virsmu pielietojums un izmantošana:
hidrofils | Prioritātes saistošs | Galvenais lietojums |
- | Molekulas, kas satur nozīmīgus hidrofobus reģionus, piemēram: lipīdus, lipoproteīnus, lielus proteīnus | Antigēna ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolekulas ar hidrofilām/hidrofobām īpašībām, piemēram: vidēji lieli proteīni, imūnglobulīni, albumīns | Double Antibody Sandwich ELISA, Antigen ELISA |
plus plus | Biomolekulas ar hidrofilām/hidrofobām īpašībām, piemēram: mazi vai lieli proteīni, imūnglobulīni, albumīns, LPS, fosforilēti proteīni, glikoproteīni | Dubulto antivielu ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoproteīni, polāro lipīdu molekulas, fosfolipīdi, kardiolipīdi | Antigēna ELISA |
Afinitātes uztveršana: afinitātes uztveršanas pamatā ir iezīmēto makromolekulu specifiskā saistīšanās ar to atbilstošajiem receptoriem. Marķētas makromolekulas var iegūt ar ķīmisku savienojumu vai gēnu inženieriju.
Affinity Capture funkcijas ir:
1.augsta specifika
2. Var uzlabot mērījumu rezultātu signāla un trokšņa attiecību
Biežāk sastopamās akas dibena virsmas ir: ar streptavidīnu (streptavidīnu) pārklāta virsma; ar niķeļa helātu (Niķeļa helātu) pārklāta virsma un virsma, kas pārklāta ar glutationu (Glutations, GSH).
3. Streptavidīna virsma: streptavidīna un biotīna augstā afinitāte un specifika tiek izmantota, lai realizētu apakšējās plāksnes saistīšanos ar pārklāto proteīnu.
4. Niķeļa helāta virsma: Niķeļa helāts ir pievienots polimēra virsmai, lai saistītu saplūsmes proteīnus ar His (histidīna) tagiem.
5. Glutationa virsma: fermentu un substrāta specifiskuma izmantošana starp glutationu un glutationa sulfhidriltransferāzi (GST), lai panāktu apakšējās plāksnes saistīšanos ar apvalka proteīnu.
Kāpēc izvēlēties BKMAM Elisa plāksni?
Izgatavots no 100% polistirola materiāla,
Piemērots adherentai šūnu kultūrai,
Plakana pamatne, vienmērīgs biezums un vienāds izmērs reakcijas stabiem,
Sterils ar atsevišķu iepakojumu,
Augsta kvalitāte ar rūpnīcas cenu.
