Šūnu kultūras pamatnosacījumi
1. Atbilstoša šūnu kultūras barotne
Piemērota šūnu kultūras barotne ir viens no svarīgākajiem nosacījumiem šūnu augšanai un proliferācijai in vitro. Kultivēšanas barotne ne tikai nodrošina šūnu barošanu un pamatvielas, lai veicinātu šūnu augšanu un vairošanos, bet arī nodrošina dzīves vidi kultivēto šūnu augšanai un vairošanai.
2. Augstas kvalitātes serums
Pašlaik lielākajai daļai sintētisko barotņu nepieciešams pievienot serumu. Serums ir viena no svarīgākajām šūnu kultūras barotnes sastāvdaļām, kas satur dažādus augšanas faktorus un citas barības vielas, kas nepieciešamas šūnu augšanai.
3. Pastāvīga šūnu augšanas temperatūra
Lai saglabātu kultivēto šūnu enerģisku augšanu, ir jābūt nemainīgai un atbilstošai temperatūrai.
4. Piemērota gāzes vide
Gāze ir viens no nepieciešamajiem nosacījumiem zīdītāju šūnu izdzīvošanai, un nepieciešamās gāzes galvenokārt ir skābeklis un oglekļa dioksīds.
5. Šūnu kultūras temperatūra
Lai saglabātu kultivēto šūnu enerģisku augšanu, ir jābūt nemainīgai un piemērotai temperatūrai. Dažādiem šūnu veidiem ir atšķirīgas prasības kultūras temperatūrai. Standarta temperatūra cilvēka šūnu kultūrai ir 36,5 grādi ± 0,5 grādi. Novirze no šī temperatūras diapazona ietekmēs normālu šūnu metabolismu un pat nomirs.
6. Piemērota gāzes vide
Gāze ir viens no nepieciešamajiem nosacījumiem zīdītāju šūnu kultūras izdzīvošanai, un nepieciešamās gāzes galvenokārt ir skābeklis un oglekļa dioksīds. Skābeklis piedalās trikarbonskābes ciklā, ražojot enerģiju šūnu augšanai un proliferācijai un sintezējot dažādus šūnu augšanai nepieciešamos komponentus.
Bieža šūnu kultūras piesārņošana
1. Baktēriju piesārņojums
Baktēriju piesārņojums ir visizplatītākais. Ja operācija ir nedaudz nepareiza, tā izraisīs šūnu piesārņojumu. Pēc baktēriju piesārņojuma tas parādīsies kā melnas plānas smilšu sloksnes, novērojot zem mikroskopa. Stieņveida utt. Otrkārt, barotne kļūst dzeltena un duļķaina, un Petri trauciņā ir skaidri redzami smalki smilšu formas nogulumi, un ik pa laikam ir dīvaina smaka.
2. Sēnīšu piesārņojums
Ar sēnītēm piesārņotais kultūras šķīdums ir dzidrs un caurspīdīgs, nevis kā liels bakteriālas infekcijas uzliesmojums, tāpēc to ir grūti laikus atklāt. Dažreiz tas izskatās kā kvēldiegs zem mikroskopa, dažreiz tas izskatās kā koraļļi, un lēnām izaugs ļoti plāns melns pavediens. Tas Kad ir par vēlu, šūnas ir grūti izglābt.
3. Piesārņojums ar pelējumu
Atbilstoši sēnīšu infekcijām, jo barotne ir dzidra, sēnīšu piesārņojumu ir grūti noteikt agri, kad bieži vien ir par vēlu. Barotnē lēnām parādījās flokulējoši piemaisījumi, un zem mikroskopa varēja redzēt pavedienu masu peldošus objektus, piemēram, kaķus vējā. Šūnas joprojām var augt, bet laika gaitā šūnas pasliktinās un pārstāj augt.
4. Mikoplazmas infekcija
Barotne kļūst duļķaina. Pēc tam, kad mikoplazma inficē šūnas, citopātiskās izmaiņas nav acīmredzamas, bet šūnu stāvoklis pasliktinās un augšana palēninās. Zem mikroskopa var būt nelieli melni plankumi, bet barotne parasti nav duļķaina. Pēc šūnu pasāžas parādījās starpšūnu melni plankumi, šūnas tika vakuolētas, un daudzas šūnas atgādināja apoptozi un nekrozi. Galu galā šūnas uzpeldēja un pilnībā nomira.
Šūnu piesārņojuma novēršana
Labu noteikumu un noteikumu izveide var ievērojami samazināt šūnu piesārņojumu. Ieskaitot piekļuves sistēmu, darbības normas un ikdienas vadības sistēmu.
Piekļuves sistēma: ieskaitot personālu un materiālus. Personāls ir jāapmāca, lai viņi varētu strādāt paši, un viņiem ir jāatbilst valkāšanas prasībām pirms ieiešanas laboratorijā, piemēram, baltos mēteļos, izolācijas halātos, maskās, cimdos utt. Nepieciešamajiem priekšmetiem ir stingri jāievēro vienreizlietojamie priekšmeti. sterilizē un sterilizē, un iegādātās preces ir jāiegādājas no regulāriem un uzticamiem kanāliem. Jauniegādātās šūnas pirms lietošanas jāpārbauda un jāpārbauda.
Darbības specifikācijas: Vislabāk ir formulēt specifikācijas parastajām darbībām, un laboratorijas personālam ir jāievēro darbības specifikācijas, kuras nevar mainīt pēc vēlēšanās, kā arī jāizveido labi laboratorijas personāla darba paradumi. Piemēram, pēc pipetes uzgaļa iesūkšanas tas otrreiz netiks izstiepts barotnē un vienreiz tiks iesūkts pietiekams daudzums barotnes. Pievienojot šķidrumu, šķidrums pēc iespējas jāpievieno suspensijā, kas var efektīvi novērst mikoplazmas piesārņojumu un šūnu savstarpēju inficēšanos. Turklāt, ja iespējams, vienlaikus darbiniet tikai vienu šūnu līniju, un labāk ir ievērot nelielu laika intervālu starp šūnām, lai izvairītos no savstarpējas inficēšanās.
Ikdienas pārvaldības sistēma: tā ietver noteikumus un metodes vides un palīgmateriālu, reaģentu uc izmantošanai, tīrīšanai un uzturēšanai. Ir arī reaģentu un palīgmateriālu patēriņa, uzskaites un iegādes pārvaldība, tostarp divu līmeņu krājumu pārvaldība šūnu paraugi. Piesārņojuma avotiem, kurus nav viegli atrast, vislabāk ir veikt regulāras pārbaudes, galvenokārt attiecībā uz mikoplazmas piesārņojumu un šūnu savstarpējo piesārņojumu.
BKMAM Bio nodrošina atbilstošus palīgmateriālus šūnu kultūrai:
Vienreizējās lietošanas plastmasas apaļie/kvadrātveida Petri trauciņi:
Augstas caurspīdīguma polistirola materiāls (PS);
Virsma ir gluda un plakana, un mikroskopā nav redzami šūnu optiski kropļojumi;
Kraušanas dizains atvieglo sakraušanu un uzglabāšanu;
Etilēnoksīda sterilizācija (EO);
Izturība pret nodilumu un koroziju.
Šūnu kultūras trauku pielīmēta apstrāde:
Polistirola materiāls (PS);
Elektronu staru sterilizācija, bez pirogēna, bez toksīniem;
Vakuuma plazmas virsmas apstrāde, lieliska šūnu adhēzija;
Virsma ir gluda un plakana, un mikroskopā nav redzami šūnu optiski kropļojumi;
Saliekams dizains atvieglo sakraušanu un uzglabāšanu.
Plastmasas šūnu kultūras plāksnes:
Polistirola materiāls (PS);
Piemērots normālai šūnu kultūrai, nelīpošas apstrādes plāksnes tipam;
Bez pirogēna, bez toksīniem, sterilizēts;
Vienkāršs asaru tipa neatkarīgs iepakojums, viegli lietojams;
Šūnu kultūras plākšņu pielipšanas apstrāde:
Polistirola materiāls (PS);
Adherent apstrādes (TC apstrāde) plāksnes tips, piemērots pielipušo šūnu kultūrai;
Bez pirogēna, bez toksīniem, sterilizēts;
Vienkāršs asaru tipa neatkarīgs iepakojums, viegli lietojams;
Visi ir plakani dibeni.
Šūnu kultūras kolbu pielīmēta apstrāde:
Polistirola materiāls (PS);
Elektronu staru sterilizācija, bez pirogēna, bez toksīniem;
Vakuuma plazmas virsmas apstrāde, lieliska šūnu adhēzija;
Elpojošs apvalks, kas veicina gāzu apmaiņu un neļauj mikroorganismiem iziet cauri.
Iekšējie/ārējie cryovials cryovials:
100% tīrs polipropilēna materiāls (PP);
Var izturēt 15psi, 121 grādu sterilizāciju;
Caurules siena ir sabiezināta, un caurules korpusam ir mērogs un rakstīšanas laukums;
Lai nodrošinātu hermētiskumu, starp caurules vāka vītni un caurules korpusu ir silikona gredzena blīvējums;
Bez DNāzes, bez RNāzes, bez pirogēna, bez endotoksīna.
