Draugiem, kuri veic ar šūnām saistītus eksperimentus, bieži ir jāizmanto šūnu sasaldēšanas metodes. Īsāk sakot, šūnu saldēta uzglabāšana ir saglabāt šūnas zemas temperatūras vidē, lai sasniegtu ilgtermiņa saglabāšanas mērķi. Pārraides procesa laikā šūnām būs noteikta mutācijas pakāpe. Lai nodrošinātu, ka šūnas joprojām var izmantot šūnu piesārņojuma un mutācijas gadījumā, dažas šūnas parasti izmanto sasaldēšanai.
Šūnu sasaldēšanas princips
Viens no principiem šūnu sasaldēšanas un atveseļošanās procesā ir "lēna sasaldēšana", lai maksimāli saglabātu šūnu vitalitāti. Vienkārši sakot, tam ir jābūt lēnam, kad tas sasalst un atdzesē, un tas ir ātri jāuzsilda, kad tas tiek atgūts no zemas temperatūras. Lēnas sasalšanas iemesls ir tas, ka, ja šūnas tiek ievietotas tieši īpaši zemas temperatūras vidē, piemēram, šķidrā slāpeklī, šūnas veido lielu ledus kristālu, kas sabojās šūnas.
Ja jūs to sasaldējat lēni, šūnas var lēnām dehidrēt, lai sasniegtu šūnu aizsardzības mērķi. Turklāt, atgūstoties, tas ir paredzēts arī tam, lai mazie ledus kristāli neveidotos lieli ledus kristāli, tas ir, smagie ledus kristālu kristāli. Tāpēc, kad visi parasti veic šūnu sasalšanu, tas vienmēr izraisa šūnu zaudējumus, kas, iespējams, ietekmēs sasalšanas posmu.
Vairākas šūnu sasaldēšanas metodes
Manuāla metode: saldētas šūnas parasti uzglabā šķidrā slāpeklī. Manuālās darbības metode ir gradienta atdzesēšana ledusskapī. Saglabājiet šūnas sasaldētajā uzglabāšanas mēģenē un ievietojiet tās ledusskapī 4 °C, -20 °C, -80 °C temperatūrā. Sasaldēts 24 stundas -80 ° C temperatūrā, pirms tiek pārnests uz šķidro slāpekli. Manuālajai dzesēšanai nav nepieciešami citu palīgmateriālu papildu papildinājumi. To var darbināt manuāli. Tas ir visvienkāršākais, bet tas nav vienkārši. Faktiskā darbība ir apgrūtinoša. Un efekts nav īpaši labs, jo šī dzesēšanas metode joprojām nav viendabīga un ne vienmēr ir piemērojama trauslākām šūnām.
Gradienta dzesēšanas kaste: tirgū pārdotā gradienta dzesēšanas kaste ir īpaši izmantota sasaldēšanas procesa vienmērīgai dzesēšanai. Dzesēšanas ātrums parasti ir -1 grādi minūtē. Ievietojiet saldēto uzglabāšanas cauruli gradienta dzesēšanas kastē un novietojiet gradienta dzesēšanas kārbu tieši ledusskapja vidē ar -80 grādu C, lai pavadītu nakti bez manuālas gradienta darbības. Pēc tam nolaidiet uzglabāšanas cauruli un ievietojiet to šķidrā slāpeklī. Gradienta dzesēšanas kārbu izmantošana ir labāka, jo tirgū esošās komerciālās dzesēšanas kastes var nodrošināt aptuveni vienādu dzesēšanas ātrumu.
Tirgū ir divas izplatītas gradienta dzesēšanas kastes. Nepieciešams pievienot izopropilu, parasti datora kastes korpusu. Lietojot, pievienojot izopenolu skalošanas līnijai lodziņā, kad to lietojat. Izopropanolu izmanto kā nesēju siltuma uzglabāšanai un sadalei.
Cita veida nav jāpievieno izopropils, putojošs, un saldētavu var novietot tieši lietošanas laikā, kas ir ērtāk ekspluatācijā.
Izopropanola dzesēšanas kārbu ieteicams nomainīt pēc vairākkārtējas lietošanas, taču, tā kā izopropanols ir kaitīgs šķidrums, kas rada kaitējumu eksperimentiem un videi, to parasti var izmantot vairākas reizes. Tomēr ir jānodrošina, lai šķidrums būtu noteiktā daudzumā.
Neprogrammēta saldēta uzglabāšana: izmantojiet neprogrammētus saldētus šķidrumus, kurus var iegādāties tirgū. Salīdzinot ar tradicionālo saldētu šķidrumu, iekšējais komponents var samazināt ledus kristāla šūnu bojājumus, tāpēc nav nepieciešams izmantot gradientu atdzišanai, kā arī nav nepieciešama gradienta dzesēšanas kaste. Saldētu uzglabāšanu var ievietot tieši ledusskapja vidē ar -80 grādu C.
Daudzi šūnu paraugi ir ļoti vērtīgi. Papildus mums tas ir jāizmanto, veicot eksperimentus. Arī saistīto produktu atlasē pēc iespējas vairāk jāizvēlas labi produkti. Izvēlieties sasaldētu uzglabāšanas cauruli ar kvalificētu kvalitāti, mēģiniet izmantot gradienta dzesēšanas rīku sasaldēšanai un maksimāli garantējiet nelielu šūnu bojājumu, lai izvairītos no nelieliem zaudējumiem nelielu bojājumu dēļ.
